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?皮膚基底細胞癌細胞的操作步驟

更新時間:2025-01-16 點擊量:113

皮膚基底細胞癌細胞的操作步驟主要包括以下幾個方面:

細胞復蘇:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養基混合均勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度2。

細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。輕輕吹打細胞,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。按5-6ml/瓶補加培養液,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6ml培養液的新皿中或者瓶中2。

細胞凍存:細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時,棄25cm2培養瓶中的培養液,用PBS清洗細胞一次。添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉移至15ml離心管中,1000rpm離心5min。用適量的凍存液重懸細胞,并放置于凍存管中。先將細胞凍存管放置于-20℃1.5h,然后將其移入-80℃2。

以上就是皮膚基底細胞癌細胞的基本操作步驟。需要注意的是,這些操作應在無菌條件下進行,以避免污染。


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