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傳代細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)原理與注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2015-10-28 點(diǎn)擊量:1380

    按照常規(guī)的組織學(xué)分類(lèi)方法,脊椎動(dòng)物和人體細(xì)胞類(lèi)型約有200余種。這些細(xì)胞在人體中呈現(xiàn)有序的空間分布。細(xì)胞是人體的結(jié)構(gòu)和功能單位。共約有40萬(wàn)--60萬(wàn)億個(gè),細(xì)胞的平均直徑在0--20微米之間。除成熟的紅血球外,所有細(xì)胞都有一個(gè)細(xì)胞核,是調(diào)節(jié)細(xì)胞作用的中心。zui大的是成熟的卵細(xì)胞,直徑在0.毫米以上;zui小的是血小板,直徑只有約2微米。而75000個(gè)精子細(xì)胞才抵得上一個(gè)卵細(xì)胞的重量。腸粘膜細(xì)胞的壽命為3天,肝細(xì)胞壽命為500天,而腦與骨髓里的神經(jīng)細(xì)胞的壽命有幾十年,同人體壽命幾乎相等。血液中的白細(xì)胞有的只能活幾小時(shí)。

傳代細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)原理:

    細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高 細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶 形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免 由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。

傳代細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞-細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):

. 從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存,但為對(duì)數(shù)生細(xì)胞。在凍存 前一天換一次培養(yǎng)液。

2. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí),要做好防護(hù)工作,以免凍傷。

3. 凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。

傳代細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞-凍存和復(fù)蘇的原則:

    慢凍快融 當(dāng)細(xì)胞冷到零度以下,可以產(chǎn)生以下 變化:細(xì)胞器脫水,細(xì)胞中可溶性物質(zhì)濃度升高,并在細(xì)胞內(nèi)形成冰晶。 如果緩慢冷凍,可使細(xì)胞逐步脫水 ,細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶;相反,結(jié)晶就大,大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、綱胞器的損傷和破裂。復(fù)蘇過(guò)程應(yīng)快融,目 的是防止小冰晶形成大冰晶,即冰晶的重結(jié)晶。

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