重組體克隆的篩選與鑒定

    由體外重組產(chǎn)生的DNA分子，通過(guò)轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)等適當(dāng)途徑引入宿主會(huì)得到大量的重組體細(xì)胞或噬菌體。然而在這些眾多的重組體中，會(huì)有多種類(lèi)型的DNA分子，其中包括：不帶任何外源DNA插入片段，僅是由線(xiàn)性載體分子自身連接形成的環(huán)狀DNA分子；由一個(gè)載體分子和一個(gè)或數(shù)個(gè)外源DNA片段構(gòu)成的重組體DNA分子；單純由數(shù)個(gè)外源DNA片段彼此連接形成的多聚DNA分子。當(dāng)然zui后這類(lèi)多聚DNA分子由于不具備復(fù)制起點(diǎn)和復(fù)制基因，不能在轉(zhuǎn)化子中存留，zui后被消耗掉成為無(wú)用的分子。盡管如此，面對(duì)由這種混合的DNA制劑轉(zhuǎn)化而來(lái)的大量的克隆群體，需要采用特殊的方法才能篩選出可能含有目的基因的重組體克隆。同時(shí)也需要用某種方法檢測(cè)從這些克隆中提取的質(zhì)粒或噬菌體DNA，看其是否確實(shí)具有一個(gè)插入的外源DNA片段。即便在這一問(wèn)題得到了證實(shí)之后，也還不能肯定這些重組載體所含有的外源DNA片段就一定是編碼所研究的目的基因的序列。為解決這一系列的問(wèn)題，從為數(shù)眾多的轉(zhuǎn)化子克隆中分離出含有目的基因的重組體克隆，需要建立一整套行之有效的特殊方法。

    目前已經(jīng)發(fā)展和應(yīng)用了一系列構(gòu)思巧妙、可靠性較高的重組體克隆檢測(cè)法，包括使用特異性探針的核酸雜交法、免疫化學(xué)法、遺傳檢測(cè)法和物理檢測(cè)法等。細(xì)胞

遺傳檢測(cè)法

    遺傳檢測(cè)法可分為根據(jù)載體表型特征和根據(jù)插入序列的表型特征選擇重組子兩種方法。

根據(jù)載體表型特征選擇重組體分子的直接選擇法

    根據(jù)載體分子所提供的表型特征直接選擇重組體DNA分子的遺傳選擇法是一種十分有效的方法，當(dāng)它與微生物學(xué)技術(shù)相配合時(shí)便可適用于大量群體的篩選。在基因工程中使用的所有的載體分子都帶有一個(gè)可選擇的遺傳標(biāo)記或表型特征。質(zhì)粒以及柯斯載體具有抗藥性標(biāo)記或營(yíng)養(yǎng)標(biāo)記，而對(duì)于噬菌體來(lái)說(shuō)，噬菌斑的形成則是它們的自我選擇特征。根據(jù)載體分子所提供的遺傳特征進(jìn)行選擇，是獲得重組體DNA分子群體的*的條件之一。正如已經(jīng)敘述過(guò)的，這種遺傳選擇法能將重組體的DNA分子同非重組體的親本載體分子區(qū)別開(kāi)來(lái)。抗生素抗性選擇基因插入失活選擇，或者是諸如β-半乳糖苷酶基因一類(lèi)的顯色反應(yīng)，便是屬于這種依據(jù)載體編碼的遺傳特性選擇重組體分子的典型方法。細(xì)胞