基因芯片技術(shù)主要分類

國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒目前已有多種方法可以將寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。這些方法總體上有兩種，即原位合成與合成點(diǎn)樣兩種。支持物有多種如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等，但需經(jīng)特殊處理。作原位合成的支持物在聚合反應(yīng)前要先使其表面衍生出羥基或氨基（視所要固定基因芯片

的分子為核酸或寡肽而定）并與保護(hù)基建立共價(jià)連接；作點(diǎn)樣用的支持物為使其表面帶上正電荷以吸附帶負(fù)電荷的探針?lè)肿?，通常需包被以氨基硅烷或多聚賴氨酸等?/p>

原位合成法主要為光引導(dǎo)聚合技術(shù)，它不僅可用于寡聚核苷酸的合成，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒也可用于合成寡肽分子。光引導(dǎo)聚合技術(shù)是照相平板印刷技術(shù)與傳統(tǒng)的核酸、多肽固相合成技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。半導(dǎo)體技術(shù)中曾使用照相平板技術(shù)法在半導(dǎo)體硅片上制作微型電子線路。固相合成技術(shù)是當(dāng)前多肽、核酸人工合成中普遍使用的方法，技術(shù)成熟且已實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。二者的結(jié)合為合成高密度核酸探針及短肽陣列提供了一條快捷的途徑。

該方法的主要優(yōu)點(diǎn)是可以用很少的步驟合成極其大量的探針陣列。例如，合成 48 （ 65536 ） 個(gè)探針的 8 聚體寡核苷酸序列僅需 4 × 8=32 步操作， 8 小時(shí)就可以完成。而如果用傳統(tǒng)方法合成然后點(diǎn)樣，那么工作量的巨大將是不可思議的。同時(shí)，用該方法合成的探針陣列密度可高達(dá)到 06/cm2 。不過(guò)，盡管該方法看來(lái)比較簡(jiǎn)單，實(shí)際上并非如此。主要原因是，合成反應(yīng)每步產(chǎn)率比較低，不到 95% 。而通常固相合成反應(yīng)每步的產(chǎn)率在 99% 以上。因此，探針的長(zhǎng)度受到了限制。而且由于每步去保護(hù)不很*，致使雜交信號(hào)比較模糊，信噪比降低。為此有人將光引導(dǎo)合成技術(shù)與半異體工業(yè)所用的光敏抗蝕技術(shù)相結(jié)合，以酸作為去保護(hù)劑，使每步產(chǎn)率增加到 98% 。原因是光敏抗蝕劑的解離對(duì)照度的依賴是非線性的，當(dāng)照度達(dá)到特定的閾值以上保護(hù)劑就會(huì)解離。所以，該方法同時(shí)也解決了由于蔽光膜透光孔間距離縮小而基因芯片

引起的光衍射問(wèn)題，有效地提高了聚合點(diǎn)陣的密度。另?yè)?jù)報(bào)導(dǎo) ，利用波長(zhǎng)更短的物質(zhì)波如電子射線去除保護(hù)可使點(diǎn)陣密度達(dá)到 00/cm2 。

復(fù)雜，除了在基因芯片研究方面享有盛譽(yù)的 Affymetrix 等公司使用該技術(shù)合成探針外，其它中小型公司大多使用合成點(diǎn)樣法。

以合成寡核苷酸探針為例，國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒該技術(shù)主要步驟為：首先使支持物羥基化，并用光敏保護(hù)基團(tuán)將其保護(hù)起來(lái)。每次選取擇適當(dāng)?shù)谋喂饽ぃ?mask ）使需要聚合的部位透光，其它部們不透光。這樣，光通過(guò)蔽光膜照射到支持物上，受光部位的羥基解保護(hù)。因?yàn)楹铣伤玫膯误w分子一端按傳統(tǒng)固相合成方法活化，另一端受光敏保護(hù)基的保護(hù)，所以發(fā)生偶聯(lián)的部位反應(yīng)后仍舊帶有光敏保護(hù)基團(tuán)。因此，每次通過(guò)控制蔽光膜的圖案（透光與不透光）決定哪些區(qū)域應(yīng)被活化，以及所用單體的種類和反應(yīng)次序就可以實(shí)現(xiàn)在待定位點(diǎn)合成大量預(yù)定序列寡聚體的目的。