人蛋白ELISA檢測試劑盒是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

　　實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。

　　一、雙抗體夾心法是檢測抗原常用的方法，操作步驟如下：

　　、將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結合的抗體及雜質。

　　2、加受檢標本：使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物，洗滌除去其他未結合的物質。

　　3、加酶標抗體：使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合。*洗滌未結合的酶標抗體，此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢物質的量正相關。

　　4、加底物：夾心式復合物中的酶催化底物成為有色產物。根據顏色反應的程度進行該抗原的定性或定量。

　　二、定量測定結果判斷：

　　人蛋白ELISA檢測試劑盒操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線，測定大分子量物質的夾心法ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，以檢測物的濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，將各濃度的值逐點連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，較呈直線的部分是理想的檢測區域。

　　實驗開始前，請提前配制好所有試劑；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時，均應用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。