大鼠神經少突膠質前體分離自腦皮層組織；大腦分左右兩個半球，大腦皮質（灰質）覆蓋著每個大腦半球的大部分，它是神經元胞體集中的地方。內部則是由神經纖維或髓鞘構成的白質。少突膠質細胞分布于中樞神經系統，在銀浸染標本中，少突膠質細胞比星狀膠質細胞小，其突起也較小而少，呈珠狀，故被稱為少突膠質細胞或寡突膠質細胞。少突膠質細胞（oligodendrocyte）是中樞神經系統（CNS）的成髓鞘神經膠質細胞，其發育要經歷少突膠質細胞祖細胞、前少突膠質細胞祖細胞、未成熟和成熟少突膠質細胞等階段。有學者將少突膠質細胞按其發育程度和形態分為三型。但是，細胞發育是一個連續的過程，其形態、表達產物和功能的演變沒有嚴格的界限，因此，其分類是相對的。這三型分別為：Ⅰ型少突膠質細胞又稱前O2A（pre-O2A progenitor cell）。細胞呈圓形，表面光滑，直徑約3μm，體外混合培養時成簇生長在星形膠質表面，具有很強的分裂增殖潛力，表達神經節苷GM1、波形蛋白和多唾液酸—神經粘附分子（polysialic acid-neural cell adhesion molecule，PSA-NCAM）等。Ⅱ型少突膠質細胞胞體常有雙極或三極突起，極少數為單極突起，直徑約7μm，有一定的分裂增殖能力。體外培養時為雙潛能細胞，既可分化為少突膠質細胞又可分化為Ⅱ型星形膠質，故又稱為少突膠質細胞-Ⅱ型星形膠質祖細胞（oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell，O2A）。O2A除表達GM1和波形蛋白外還表達神經節苷GD3和GQ（淋巴雜交瘤株A2B5產生GQ的抗體），故常用A2B5抗體標記O2A。Ⅲ型少突膠質細胞不再具有分裂增殖能力，為分裂終期細胞。直徑約10μm。根據其形成髓鞘的能力，又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質細胞。不成熟的OL胞體常伸出4～5條較粗大突起，表面還殘留有A2B5標記物，同時也表達O1-O4抗原，無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質細胞突起有如蜘蛛網，大量表達半乳糖腦苷脂（galactocerebro side，GC）、蛋白脂蛋白（proteio lipid protein，PLP）、髓鞘堿性蛋白（myelin basic protein，MBP）等，有對軸突髓鞘化的能力。體外培養的少突膠質細胞前體細胞（簡稱少突膠質細胞前體細胞）包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質細胞，前兩者具有增殖能力。
方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質采用yi蛋白酶消化、混合細胞營養缺失培養、搖床振蕩結合差速貼壁法并通過專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶
質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠神經少突膠質前體經A2B5免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

本公司所有產品僅供科學實驗，不做其他科學實驗外的使用！

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養基 含B-27、PDGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次；

生長特性 貼壁

細胞形態 雙極、多極形

傳代特性 不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

準備工作

1. 實驗器材準備：準備無菌的培養皿、培養瓶、移液管、離心管、手術器械等，并進行高壓滅菌或其他合適的消毒處理。

2. 試劑準備：配制或購買合適的培養基、消化酶（如、膠原酶等）、胎牛血清、雙抗等試劑，確保其無菌且在有效期內。

3. 實驗動物或組織來源準備：根據實驗需求，選擇合適的動物并進行相應的麻醉或處死，獲取所需組織；或從已有的組織樣本庫中獲取組織。

取材與處理

1. 取材：在無菌條件下，迅速取出目標組織，盡量減少對組織的損傷，并去除多余的脂肪、結締組織等非目的組織。

2. 清洗：將取出的組織用預冷的無菌PBS沖洗數次，以去除血液和雜質。

3. 剪切：將組織剪成約1 - 2mm3的小塊，以便后續消化。

細胞分離

1. 消化：將剪碎的組織塊放入含有適量消化酶的離心管中，在37℃恒溫搖床或培養箱中消化一段時間。期間可輕輕搖晃離心管，使消化更均勻。

2. 終止消化：當組織塊大部分被消化成單細胞懸液或小細胞團時，加入含血清的培養基終止消化。

3. 過濾與離心：用細胞篩過濾細胞懸液，去除未消化的組織碎片，然后將濾液以適當的轉速離心，收集細胞沉淀。

細胞觀察與檢測

1. 日常觀察：每天用倒置顯微鏡觀察細胞的形態、生長狀態、密度等，記錄細胞的變化情況，如發現細胞污染或異常，及時采取相應措施。
2. 細胞計數與活力檢測：在需要時，可采用臺盼藍染色等方法對細胞進行計數和活力檢測，以了解細胞的生長情況和健康狀態。

一、取材與分離

1. 快速操作

- 組織取材后需立即處理，避免長時間暴露于室溫或非營養環境。

- 使用無菌 PBS 或生理鹽水沖洗組織，去除血液、雜質。

2. 消化酶選擇

- 根據組織類型選擇消化酶，避免過度消化導致細胞損傷。

- 消化時間需嚴格控制（通常 10-30 分鐘），可通過顯微鏡觀察細胞解離狀態。

二、培養條件優化

1. 培養基選擇

- 使用含血清或特定生長因子的培養基（如 DMEM、RPMI 1640 等），部分細胞需添加胰島素、EGF 等。

- 避免頻繁更換培養基品牌或批次，減少細胞適應壓力。

2. 貼壁與傳代

- 原代細胞貼壁能力較弱，可能需要包被培養皿（如膠原蛋白、多聚賴氨酸）。

- 傳代時密度建議控制在 70%-80%，過度匯合會導致接觸抑制和分化。

三、污染控制

1. 無菌操作

- 全程在超凈臺操作，使用一次性耗材，避免交叉污染。

- 培養基中可添加雙抗，但長期使用可能影響細胞活性。

2. 支原體檢測

- 定期檢測支原體污染（如 PCR 法），污染后需及時丟棄細胞。

四、狀態監控

1. 日常觀察

- 每天檢查細胞形態、密度及培養基顏色，及時更換培養基（通常每 2-3 天換液一次）。

- 異常形態（如細胞變圓、碎片增多）可能提示污染或營養不足。

2. 傳代與凍存

- 原代細胞分裂次數有限（一般 5-10 代），需及時凍存早期代次細胞。

- 凍存液建議使用 DMSO+血清（或專用凍存培養基），梯度降溫后液氮保存。