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使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意:可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二:RT(逆轉(zhuǎn)錄)反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系(20 μL 體系)
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶(含 RI),
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng),然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用,丌需要純化。?產(chǎn)品名稱: 異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒價格
規(guī)格:48T/盒
類別:熒光-PCR法
運(yùn)輸:低溫、避光、快遞免費(fèi)送貨上門。
用途:生化實(shí)驗(yàn),合成實(shí)驗(yàn)等試驗(yàn)。
運(yùn)輸及保存:低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑:樣品 RNA。
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性能指標(biāo):點(diǎn)擊了解更多熒光-PCR法。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達(dá)到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)*,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 5-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至0kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.~umol或0~00pmol,以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。?2-氨苯并噻唑 2 ug pTrxFus 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
4-基-5-(beta-羥乙基)噻唑 2 ug pBAD/Myc-His A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2-巰基甲苯 2 ug pTrx-SUMO 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
2-氨苯醇 2 ug pTT5 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
-叔丁氧羰基哌啶-4-甲 2 ug pTWIN 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
BOC-L-丙氨 2 ug pTWIN 2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
叔丁氧羰酰基肌氨 2 ug pTXB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
(S)-2-(叔丁氧基羰基-氨基)-3-基丁 2 ug pTYB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
4-(溴烷)苯乙 2 ug pTYB 2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
赤血鹽 2 ug pTYB 4 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
氟硼鈉 2 ug pTYB 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
硼鉀 2 ug pTYB 2 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
D-(-)-酒石二乙酯 2 ug pUB6/V5 His A 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
L-谷氨鹽鹽 2 ug pUB6/V5 His B 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
原戊*酯 2 ug pBBR-MCS-6 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
異尖線蟲(Ani)核酸檢測試劑盒價格RV(RotavirusIgM) 人輪狀病毒IgM CAS: 26583 規(guī)格: .5g
CT 大鼠降鈣素 CAS: 9004-32-4 規(guī)格: .5g
ECHO IgM(EchoVirus IgM) 人艾柯病毒IgM CAS: 78-44-4 規(guī)格: g
RSV(anti-respiratory syncytial virus antibody) 人抗呼吸道合胞病毒抗體 CAS: 2593534 規(guī)格: 500mg
OT/BGP 大鼠骨鈣素/骨谷氨蛋白 CAS: 72956-09-3 規(guī)格: 200mg
MV IgM(measlesvirus IgM) 人麻疹病毒IgM CAS: 規(guī)格: 5mg
sRANKL 大鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基 CAS: 98903-20-5 規(guī)格: 5mg
TSH 大鼠促甲狀腺素 CAS: 72955-94-3 規(guī)格: 20mg
Cox V-IgM(Coxsackie virus IgM) 人柯薩奇病毒IgM CAS: 5997-5-4 規(guī)格: 5mg
Cortisol 大鼠 CAS: 836-62-0 規(guī)格: 5mg
Cox V-IgG(Coxsackie virus IgG) 人柯薩奇病毒IgG CAS: 規(guī)格: 25mg
E2 大鼠雌二醇 CAS: 5376-49-7 規(guī)格: 200mg
TB-Ab IgG(tuberculosis antibody IgG) 人結(jié)核菌桿抗體IgG CAS: 86-74-8 規(guī)格: 50mg
CP(cicatricial Pemphigoid) 人瘢痕性天皰瘡抗體 CAS: 規(guī)格: 75mg
HBV preS2Ab(hepatitis B virus) 人乙型肝炎病毒前S2抗體 CAS: 224-72-4 規(guī)格: 0mg
企業(yè)信息
ENTERPRISE INFORMATION上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
3004918891發(fā)送信件產(chǎn)品分類
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