使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
?產(chǎn)品名稱：鼻疽假單胞菌PCR檢測試劑盒品牌
英文名稱：Pseudomonas malleiPCR
規(guī)格：詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸：低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途：生化實驗，合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑：樣品 RNA。

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性能指標：點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現(xiàn)性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項：
①加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 5-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?化山羊抗親和素英文名(EN)：Ethyl 2-bromopropionate,99%CAS No.：535--5規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

RecA蛋白英文名(EN)：Ethyl bromoacetate,98%CAS No.：05-36-2規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

RecA蛋白英文名(EN)：Isopentyl nitrite,96%CAS No.：0-46-3規(guī)格(SP)：00ML類別(Key)：通用試劑

Tth RecA 蛋白英文名(EN)：Ethyl pyruvate,≥97%CAS No.：67-35-6規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：通用試劑

T4 噬菌體基因 32 蛋白英文名(EN)：TriethylphosphineCAS No.：425-25-規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：表面活性劑

T4 噬菌體基因 32 蛋白英文名(EN)：Triisopropylphosphine,90%CAS No.：6476-36-4規(guī)格(SP)：500MG類別(Key)：通用試劑

*熱穩(wěn)定單鏈結(jié)合蛋白英文名(EN)：ALLYL-TRIPHENYL-PHOSPHONIUM, CHLORIDECAS No.：8480-23-4規(guī)格(SP)：25G類別(Key)：表面活性劑

兔肌動蛋白英文名(EN)：Allyltriphenylphosphonium bromide,99%CAS No.：560-54-9規(guī)格(SP)：50G類別(Key)：表面活性劑

腺苷脫酶英文名(EN)：Allyldiphenylphosphine,95%CAS No.：274-38-0規(guī)格(SP)：2G類別(Key)：表面活性劑

β －瓊脂糖酶英文名(EN)：Trimethylphosphine,96%CAS No.：594-09-2規(guī)格(SP)：G類別(Key)：表面活性劑

縮酶英文名(EN)：Trimorpholinophosphine oxide,99%CAS No.：928424規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：表面活性劑

D- 基酸氧化酶英文名(EN)：Triphenylphosphine dibromide,96%CAS No.：034-39-5規(guī)格(SP)：0G類別(Key)：表面活性劑

L- 基酸氧化酶英文名(EN)：Triphenylpropylphosphonium bromide,98%CAS No.：6228-47-3規(guī)格(SP)：50G類別(Key)：表面活性劑

精酸酶英文名(EN)：Triphenylvinylphosphonium bromide,97%CAS No.：5044-52-0規(guī)格(SP)：5G類別(Key)：通用試劑

天酶英文名(EN)：Tris(dimethylamino)phosphine,97%CAS No.：608-26-0規(guī)格(SP)：5ML類別(Key)：通用試劑

天冬酸轉(zhuǎn)酶英文名(EN)：Tri(p-tolyl)phosphine,98%CAS No.：038-95-5規(guī)格(SP)：G類別(Key)：通用試劑

碳酸酐酶 ( 牛紅血球 )英文名(EN)：Tri(m-tolyl)phosphine,98%CAS No.：6224-63-規(guī)格(SP)：G類別(Key)：通用試劑

羧肽酶 A( 牛胰 )英文名(EN)：Trimethyl phosphite,99%CAS No.：2-45-9規(guī)格(SP)：00ML類別(Key)：通用試劑
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