河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉錄）反應合成 cDNA
. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉錄酶（含 RI），
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 0 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
產品名稱：河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱：Chinese Mitten Crabs Trembling Disease VirusRTPCR
規格：詳見說明書
類別:PCR檢測試劑盒
運輸：低溫、避光、快遞免費送貨上門。
用途：生化實驗，合成實驗等試驗。
運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存, 保存期限為 6 個月。
自備試劑：樣品 RNA。

性能指標：點擊了解更多PCR檢測試劑盒。
.河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒試劑盒檢測特異性為00%
2. 檢測試劑盒重現性為00%
3. 靈敏度可達到03/ml
4. 有效期為6個月
注意事項：
①加入試劑的順序應*，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。
反應五要素：
河蟹顫抖病病毒PCR檢測試劑盒參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 5-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.～umol或0～00pmol，以低引物量產生所需要的結果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
?標準品  英文名稱：Methyl Salicylate (AS)  CAS:9-36-8

棕櫚油酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Palmitoleate   CAS:20-25-8

棕櫚酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Palmitate   CAS:2-39-0

油酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Oleate   CAS:2-62-9

肉豆蔻酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Myristate   CAS:24-0-7

亞麻酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Linolenate   CAS:30-00-8

甲酯標準品  英文名稱：Methyl Linoleate   CAS:2-63-0

月桂酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Laurate   CAS:-82-0

甲基異丁基甲酮標準品  英文名稱：Methyl Isobutyl Ketone  CAS:08-0-

2-丁酮¤標準品  英文名稱：Methyl Ethyl Ketone  CAS:78-93-3

辛酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Caprylate   CAS:--5

己酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Caproate   CAS:06-70-7

癸酸甲酯標準品  英文名稱：Methyl Caprate   CAS:0-42-9

甲基亞芐亞基樟腦標準品  英文名稱：Methyl Benzylidene Camphor  CAS:3686-47-9

甲醇標準品  英文名稱：Methyl Alcohol   CAS:67-56-
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